Pengertian Elektroforesis

asam deoksiribonukleat (DNA) elektroforesis digunakan untuk memetakan urutan fragmen pembatasan dalam kromosom, untuk menganalisis variasi DNA dalam populasi dengan panjang fragmen restriksi polimorfisme (RFLPs), dan untuk menentukan urutan nukleotida sepotong DNA.

Elektroforesis mengacu pada migrasi molekul bermuatan melalui matriks ketat, atau gel, ditarik oleh kekuatan listrik. Sebagai kekuatan menyeret molekul melalui gel, dia menemui hambatan dari helai gel, memperlambat laju migrasi.

Dalam elektroforesis gel, molekul yang lebih besar bermigrasi lebih lambat daripada yang lebih kecil, sehingga jarak migrasi dalam gel dapat digunakan untuk menentukan ukuran molekul.

Meskipun mungkin untuk memisahkan kromosom seluruh menggunakan teknik elektroforesis khusus, DNA yang akan dianalisis dengan elektroforesis biasanya dipotong-potong kecil menggunakan enzim restriksi.

Fragmen DNA disiapkan oleh pengobatan dengan enzim restriksi biasanya dipisahkan satu sama lain, dan ukuran mereka ditentukan, menggunakan gel elektroforesis agarosa, karbohidrat kompleks. DNA bermuatan negatif karena ikatan fosfodiester yang bergabung dengan blok bangunan nukleotida individu.

DNA karena itu akan Electrophorese menuju elektroda positif ketika ditempatkan dalam medan listrik. Untuk memvisualisasikan hasil setelah elektroforesis, gel direndam dalam larutan yang menyebabkan DNA untuk berpendar bila terkena sinar ultraviolet.

Pengobatan sampel DNA dengan beberapa enzim restriksi dalam berbagai kombinasi memungkinkan peneliti untuk menghasilkan pembatasan peta fragmen DNA asli, yang mengidentifikasi situs di mana DNA enzim restriksi yang.

Banyak pertanyaan penelitian membutuhkan analisis rinci dari satu fragmen DNA tertentu dalam campuran kompleks. Dalam kasus tersebut, probe DNA radioaktif dapat digunakan untuk mengidentifikasi fragmen berdasarkan urutan nukleotida tersebut.

Metode, yang dikenal sebagai hibridisasi, didasarkan pada aturan pasangan basa komplementer (A obligasi T, obligasi G to C). Sebuah probe dirancang yang urutan melengkapi potongan DNA untuk dideteksi. DNA gel dipisahkan pertama ditransfer ke membran nilon menggunakan teknik yang disebut noda Selatan.

Selama prosedur blotting, untai dalam DNA helix ganda yang terpisah satu sama lain, atau terdenaturasi, dengan pengobatan dengan basis. Karena DNA untai ganda lebih stabil daripada untai tunggal, selama hibridisasi probe untai tunggal akan mencari dan mengikat fragmen gel dipisahkan untai tunggal dengan urutan komplementer.

Menjadi fluorescent atau radioaktif, posisi probe dapat ditentukan dengan menggunakan metode fotografi. Urutan target kemudian dapat dihapus dengan memotong di bagian dari gel yang berisi itu.

Teknik yang paling umum untuk menentukan urutan DNA adalah metode Sanger, yang menghasilkan fragmen yang berbeda dalam panjang oleh nukleotida tunggal. Resolusi tinggi elektroforesis gel poliakrilamid kemudian digunakan untuk memisahkan fragmen dan memungkinkan urutan yang akan ditentukan.

Elektroforesis asam ribonukleat (RNA) merupakan prosedur yang tidak terpisahkan dalam banyak studi ekspresi gen. RNA diisolasi, dipisahkan dengan elektroforesis, dan kemudian fragmen gel dipisahkan RNA ditransfer ke membran nilon menggunakan teknik yang disebut blot Utara. Hibridisasi dengan probe DNA untai tunggal kemudian digunakan untuk menentukan posisi fragmen RNA tertentu.

Pengertian Elektroforesis
Pengertian Elektroforesis

DNA dan RNA yang relatif sederhana dalam hal struktur dan komposisi. Protein, bagaimanapun, terdiri dari dua puluh asam amino yang berbeda dalam berbagai kombinasi, dan protein bervariasi secara signifikan dalam struktur tiga dimensi. Komposisi asam amino akan mempengaruhi biaya pada protein, yang pada akhirnya akan mempengaruhi perilaku elektroforesis nya.

Bentuk protein sama akan mempengaruhi laju migrasi. Akibatnya, teknik khusus, elektroforesis gel SDS-poliakrilamida (SDS-PAGE), biasanya digunakan untuk menganalisis protein. Dalam metode ini, sampel protein dipanaskan dan kemudian diobati dengan sulfat natrium dodesil deterjen (SDS). Protein diperlakukan dengan cara ini berlangsung, linear, dan seragam dilapisi oleh molekul deterjen bermuatan negatif.

Tingkat migrasi protein diperlakukan berbanding terbalik dengan logaritma berat molekul. Setelah elektroforesis, protein pada gel dapat diwarnai untuk memvisualisasikan semua protein dalam sampel, atau protein dalam gel dapat ditransfer ke membran nilon (Western blot) dan orang-orang tertentu terdeteksi dengan penggunaan enzim antibodi -linked.

Terlepas dari makromolekul yang sedang dipelajari, gel elektroforesis adalah teknik penting untuk ahli biologi molekuler. Banyak pertanyaan ilmiah dapat dijawab dengan menggunakan elektroforesis, dan sebagai hasilnya laboratorium penelitian biologi molekuler aktif akan memiliki beberapa bangku yang dikhususkan untuk reagen khusus yang diperlukan dan peralatan.